堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法

測定方法：分光光度法

產品規格：50管/24樣

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法

測定原理：

在堿性環境中，AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與4-氨基和鐵KCN 反應紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510 nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚標準液，4℃保存。

粗酶液提?。?br/>

1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2.細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱30min，調節波長到510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸餾水，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入20μL標準品，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A標準管。

5.對照管：取EP管，加入20μL上清液，200μL蒸餾水，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。每個測定管設一個對照管。